Hei kaikille!
Minun pitäisi saada kolmen alukkeen multiplex-PCR toimimaan. Olen selannut lukemattomia web-sivuja, jotka käsittelevät PCR troubleshootingia; tuntuu siltä että erilaisia muutettavia muuttujia olisi loputon määrä.
Kysyisinkin, jos palstalla liikkuisi molekyylibiologeja, mitkä ovat ensimmäiset konstinne, kun PCR mättää. Tässä protokollassa pitäisi saada, näytteestä riippuen, kaksi juostetta. Toinen juoste näkyy selvästi, toinen ei ja tulokset eivät siksi ole luotettavia.
Minun pitäisi saada kolmen alukkeen multiplex-PCR toimimaan. Olen selannut lukemattomia web-sivuja, jotka käsittelevät PCR troubleshootingia; tuntuu siltä että erilaisia muutettavia muuttujia olisi loputon määrä.
Kysyisinkin, jos palstalla liikkuisi molekyylibiologeja, mitkä ovat ensimmäiset konstinne, kun PCR mättää. Tässä protokollassa pitäisi saada, näytteestä riippuen, kaksi juostetta. Toinen juoste näkyy selvästi, toinen ei ja tulokset eivät siksi ole luotettavia.
Vastaukset 1
Vanhimmat
Minä olen lähinnä tehnyt töitä mikrosatelliittien kanssa, ja en ole ihan vama, auttaako nämä neuvot sinun ongelmaasi...
Voisitko yrittää alentaa annealing-lämpötilaa? Silloin hieman epäspesifinkin aluke voi tarttua.
Tai sitten, jos on kyse yhden alukkeen heikosta toiminnasta, niin laita sitä mastermixiin enemmän ja vastaavasti vähennä puskurin määrää.
Ja joskus vaan joutuu tekemään kolme simplex-ajoa yhden 3-multiplexin sijaan, kun ei muuten toimi...