Kun eristää DNA:ta esim. verestä ja alkaalisen lyysin jälkeen saostetaan DNA isopropanolilla, niin miksi sakkaa ei näe kunnolla fuugauksen jälkeen? Vasta pestessä 70% etanolilla näkyy ensin sellainen "minisakka" ja fuugauksen jälkeen näkee vielä enemmän. Laborantti-tuttavani väitti, että on "tärkeintä" nähdä jo siinä alkuvaiheessa sakka, että tietää eristävänsä DNA:ta. En ymmärrä, miksi? Siis eikö se riitä, että lopputuloksena näkee oikean valkoisen sakan, jota ei saa edes kunnolla liuotettua? Vai onko se loppusakka kenties jotain muuta kuin DNA:ta?!
Olisin tosi kiitollinen vastauksesta.
Olisin tosi kiitollinen vastauksesta.
Vastaukset 1
Vanhimmat
Jos DNA:ta on paljon niin se näkyy kyllä jo isopropanolilla saostettuna viskoottisena massana. Mikäli DNA:ta on vähän, et sakkaa näe ennen kuin fuugauksen jälkeen. Sakan näkemisellä ei ole siis mitään merkitystä. Tuo etanolipesuhan tehdään niin että fuugatun sakan päälle lesketaan 70% etanoli; sitä ei siis suspensoida siihen. Fuugataan, poistetaan, kuivataan ja liuoitetaan. Itse asiassa DNA on täysin näkymätöntä, ja mitä enemmän näet valkoista sakkaa niin sitä enemmän näytteessä on proteiineja sekä suoloja, eli näyte ei ole puhdas. Mitä näkymättömämpi sakka on, sitä puhtaampaa DNA:ta se sisältää. Genominen DNA liukenee kunnolla vasta kun sitä inkuboi 2 h 55C, ja sekoittelee siinä ohessa huolellisesti.